|
|
Mapping of regulatory elements within 5' region of the Disp3 locus
Oltová, Jana ; Bartůněk, Petr (vedoucí práce) ; Krásný, Libor (oponent)
Dispatched 3 (Disp3), gen regulovaný thyroidálním hormonem, je v naší laboratoři intenzivně studován. Podle fenotypu buněk s nadexprimovaným Disp3 a expresního profilu tohoto genu by Disp3 mohl být propojujícím článkem mezi thyroidálním hormonem a homeostázou cholesterolu v mozku. Domníváme se, že by také mohl hrát roli v patogenezi některých neurodegenerativních onemocnění a mozkových nádorů. Tato práce je zaměřena na proces regulace tohoto genu prostřednictvím receptoru pro thyroidální hormon (TR). Konkrétně si dává za cíl identifikovat responsivní elementy, které jsou důležité pro tuto regulaci. Navíc byly hledány také elementy rozpoznávané jaterním receptorem X (LXR), který nasedá na stejně uspořádané repetice jako TR a existuje mnoho genů, které jsou regulovány oběma těmito receptory. Zkombinovali jsme in silico analýzu Disp3 lokusu s luciferázovými reporterovými esejemi. Zaujal nás cluster šesti responsivních elementů predikovaných v blízkosti prvního exonu, z nichž dva se ukázaly být konzervované mezi myší a člověkem. Na základě toho byly připraveny reportéry různě zkrácených variant této 3 kb dlouhé oblasti, které umožnily tuto sekvenci analyzovat detailně. Reportérové eseje nepotvrdily přítomnost žádného klíčového responsivního elementu aktivovaného TR nebo LXR, ale na 3' konci byla objevena oblast...
|
|
|
Role genu Disp3 v buněčné proliferaci
Ditrychová, Karolína ; Zíková, Martina (vedoucí práce) ; Pospíchalová, Vendula (oponent)
Jedním z hlavních projektů naší laboratoře je výzkum funkce proteinu Dispatched 3 (DISP3). Tento protein se řadí do rodiny proteinů obsahujících sterol sensing doménu (SSD). Gen, který ho kóduje, byl dříve popsán jako regulovaný thyroidním hormonem a k jeho expresi dochází především v neurální tkáni. Naše nepublikovaná data ukazují jeho zvýšenou hladinu v meduloblastomech, velice častých nádorech mozečku u nezletilých. Na základě těchto zjištění jsme začali studovat roli DISP3 v lidských rakovinných buňkách. Cílem této práce je sledovat vliv zvýšené nebo snížené exprese DISP3 na buněčnou proliferaci a diferenciaci jednak v lidských buněčných liniích, jednak v myšších neurálních progenitorech. Za tímto účelem jsme si vybrali buněčné linie DAOY a D341 pocházející z lidských meduloblastomů, které se výrazně liší mírou exprese DISP3, a linii myšších neurálních multipotentních progenitorů C 17.2, v nichž je DISP3 exprimován velmi slabě. Ukázali jsme, že zvýšená exprese DISP3 v buněčných liniích DAOY a C 17.2 vede ke zvýšení buněčné proliferace. Dále jsme diferencovali buněčnou linii C 17.2 do neuronů a astrocytů a sledovali, že buňky se zvýšenou expresí DISP3 projevují menší ochotu podstoupit diferenciační proces, což jsme následně potvrdili pomocí specifických markerů. Za použití CRISPR-Cas9 systému...
|
|
|
Mapping of regulatory elements within 5' region of the Disp3 locus
Oltová, Jana ; Bartůněk, Petr (vedoucí práce) ; Krásný, Libor (oponent)
Dispatched 3 (Disp3), gen regulovaný thyroidálním hormonem, je v naší laboratoři intenzivně studován. Podle fenotypu buněk s nadexprimovaným Disp3 a expresního profilu tohoto genu by Disp3 mohl být propojujícím článkem mezi thyroidálním hormonem a homeostázou cholesterolu v mozku. Domníváme se, že by také mohl hrát roli v patogenezi některých neurodegenerativních onemocnění a mozkových nádorů. Tato práce je zaměřena na proces regulace tohoto genu prostřednictvím receptoru pro thyroidální hormon (TR). Konkrétně si dává za cíl identifikovat responsivní elementy, které jsou důležité pro tuto regulaci. Navíc byly hledány také elementy rozpoznávané jaterním receptorem X (LXR), který nasedá na stejně uspořádané repetice jako TR a existuje mnoho genů, které jsou regulovány oběma těmito receptory. Zkombinovali jsme in silico analýzu Disp3 lokusu s luciferázovými reporterovými esejemi. Zaujal nás cluster šesti responsivních elementů predikovaných v blízkosti prvního exonu, z nichž dva se ukázaly být konzervované mezi myší a člověkem. Na základě toho byly připraveny reportéry různě zkrácených variant této 3 kb dlouhé oblasti, které umožnily tuto sekvenci analyzovat detailně. Reportérové eseje nepotvrdily přítomnost žádného klíčového responsivního elementu aktivovaného TR nebo LXR, ale na 3' konci byla objevena oblast...
|
host ::
RSS.